《表1 引物序列：苦荞鼠李糖基转移酶FtF3GT1基因的克隆与转化毛状根研究》

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《苦荞鼠李糖基转移酶FtF3GT1基因的克隆与转化毛状根研究》

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在中国农业科学院作物科学研究所荞麦基因资源创新研究组提供Me JA处理的苦荞转录组数据库中筛选获得Ft F3GT1基因，根据Ft F3GT1基因的ORF设计特异引物（表1），以川荞1号c DNA为模板，以1.2所述DNA为模板进行PCR扩增，获得目的基因的CDS序列。PCR程序为95℃预加热3min；95℃保持30s使模板变性；60℃复性30s，使引物和模板充分退火，72℃保持60s，使引物充分延伸，合成DNA，完成一个循环，共35个循环。PCR纯化产物连接到p TOPO-Blunt Simple平末端克隆载体上，获得Ft F3GT1-T载体质粒。由北京博迈德生物技术有限公司测序、分析和拼接后得到Ft F3GT1基因全长序列。将Ft F3GT1基因氨基酸序列在NCBI数据库中Blast比对，获得其他物种GTs类蛋白序列。采用Bioxm软件翻译氨基酸序列，预测其蛋白质大小及等电点，利用MEGA 7.0软件中的Neighbour-Joining算法构建系统进化树。