《表1 用于樗蚕孵化酶基因克隆的引物名称及其序列》

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《樗蚕孵化酶基因的克隆与表达特征分析》

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参照昆虫孵化酶基因保守序列设计简并引物Insect HE-F、Insect HE-R（表1），以催青第9天卵样品的c DNA第1链为模板进行扩增。反应体系50μL，包括10×PCR buffer 5μL，25 mmol/L d NTP 4μL，10μmol/L上、下游引物各1μL，c DNA模板1μL，5 U/μL Ex Taq酶0.5μL，dd H2O 35.5μL。反应条件:94℃预变性5 min；94℃变性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸1 min，共5个循环；94℃变性30s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，共5个循环；94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸1 min，共25个循环；72℃延伸5 min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测，将目的条带切胶回收，连接至p MD18-T克隆载体后转化大肠埃希菌TOP10感受态细胞，经PCR验证后，对阳性克隆菌株进行测序。