《表8 反应体系：辣椒尿黑酸植基转移酶基因(HPT)的克隆及生物信息学分析》

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《辣椒尿黑酸植基转移酶基因(HPT)的克隆及生物信息学分析》

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根据基因序列和pet-30a载体序列信息设计无缝连接引物:Guo3f:5'-gaacacgggggactctagaggatccatgg catctttgtttattgggtc-3'；Guo3r:5'-TGAACGATCGGGG AAATTCGAGCTCTCACCTCACAAGCGTACGAGC-3。配制反应体系（表8），PCR反应条件为:95℃5min；95℃40 s，60℃30 s，72℃4 min，35个循环；72℃10 min。质粒pbi121用Bam HⅠ、SacⅠ酶切，胶回收大片段。将DNA片段和线性化载体加0.5～5μL，2×Seamless Master Mix加5μL，加入ddH2O使总反应体积达到10μL。在50℃反应15 min，然后将离心管放置于冰上，之后将质粒转化入大肠杆菌，挑选阳性克隆进行PCR送至北京吉百特生物公司进行测序。