《表2 PCR反应程序：人ALOX5AP基因启动子的克隆及生物信息学分析》

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《人ALOX5AP基因启动子的克隆及生物信息学分析》

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用外周血基因组DNA提取试剂盒提取志愿者血液中的DNA，以此为模板，利用高保真聚合酶PCR扩增人ALOX5AP基因启动子区域2 000 bp的DNA序列，PCR反应程序如表2所示。纯化回收PCR产物后，与pGL3-basic空载体同时以限制性内切酶MluⅠ和HindⅢ双酶切，酶切产物经琼脂糖凝胶电泳检测，并用试剂盒切胶回收两目的片段。定量后，将两片段以摩尔比1∶10的比例混合均匀，加入1μL T4 DNA连接酶，16℃过夜连接以制备重组质粒。快速热激法在固体LB培养基（氨苄青霉素50μg/m L）的培养皿中转化重组质粒。第2天在培养皿上挑取单克隆，振荡培养16～20 h，质粒提取试剂盒提取质粒DNA，命名为p GL3-A2000。