《表1 实验所用引物:嗜碱盐单胞菌X3中异化型硝酸盐还原酶编码基因簇的功能验证及蛋白结构预测》

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《嗜碱盐单胞菌X3中异化型硝酸盐还原酶编码基因簇的功能验证及蛋白结构预测》


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以硝酸盐还原培养基培养菌株X3,运用RNA提取试剂盒提取该菌株的总RNA,用0.7%琼脂糖凝胶电泳和超微量核酸蛋白分析仪检测RNA的质量。引物选用NarG1F、NarG1R(见表1)。实时荧光定量PCR的反应体系采用25μL:2×One Step RT-PCR Buffer III 12.5μL,TaKaRa Ex TaqHS0.4μL,PrimeScript RT Enzyme Mix II 0.4μL,引物(10μmol/L)各0.5μL,Eva green 0.8μL,模板1μL(其中阳性对照为菌株X3的基因组DNA,阴性对照为无菌水,实验组为总RNA),RNase Free dH2O 8.9μL。反应时间为42℃,10min;95℃,1min;95℃,10s;55℃,30s。