《表1 实验所用引物：锌指核酸酶介导的陆川猪Fat1基因打靶载体构建及体外转基因研究》

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《锌指核酸酶介导的陆川猪Fat1基因打靶载体构建及体外转基因研究》

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DS1：同源重组引导序列左同源臂1；DS2：同源重组引导序列右同源臂2；ZFN：锌指核酸酶；eGFP：增强绿色荧光蛋白；下划线：酶切位点

根据NCBI已公布的奶牛rRNA基因家族全序列（DQ222453）和部分猪rRNA基因中的18S基因序列，设计引物P1、P2和P3、P4（全文所用引物序列见表1），以陆川猪基因组DNA为模板，使用LA Taq配合GC buffer进行陆川猪rRNA基因序列的PCR扩增，引物P3和P4扩增片段为3 370 bp。PCR反应体系:1μL的陆川猪基因组DNA，10μL的2×GC BufferⅠ，2μL的引物混合物（10 pmol/μL），2μL的dNTPs，0.3μL的LA Taq和5μL的ddH2O。PCR扩增反应的程序为94℃预变性5 min；98℃变性10s，60℃退火30 s，72℃延伸3 min，30个循环；72℃后延伸10 min。扩增所得PCR产物纯化后亚克隆进TA克隆载体，测序后得到陆川猪rRNA基因的部分序列。