《表2 qRT-PCR引物信息》

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《高油酸油菜脂肪酸代谢相关微效基因筛选及验证》

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OPR:1，2-氧代植物二烯酸还原酶基因；AT:乙酰转移酶基因；UBC9:泛素结合酶9基因；下同

通过Primer Premier 6.0软件，分别根据OPR和AT基因保守序列（Tair，https://www.arabidopsis.org/和Brassica Database，http://brassicadb.org/brad/index.php）设计引物（表2），由擎科生物技术有限公司（长沙）合成。检测合格的RNA按照TransScript OneStep gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix（北京全式金生物技术有限公司）说明书进行反转录。对引物进行检测（刘芳等，2015），然后按照TransS-cript Tip Green qRT-PCR SuperMix（北京全式金生物技术有限公司）说明书，使用CFX96TMReal-Time System（BIORAD，美国），以泛素结合酶9（ubiquitin conjugating enzyme 9，UBC9）为内参基因，采用两步法进行qRT-PCR验证。qRT-PCR反应体系为20μL:c D-NA模板2μL，正反向引物（0.2μmol/L）各0.4μL，2×TransStart?Tip Green qPCR SuperMix 10μL，Passion Reference Dye（50×）0.4μL，ddH2O 6.8μL。扩增程序为:94℃预变性30s；94℃变性5s，60℃退火30 s，40个循环；溶解曲线分析参照CFX96TMRealTime System使用说明书。以Pfaffl等（2001）的方法进行基因表达分析。实验重复3次，取平均值。