《表2 qRT-PCR引物序列信息》

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《MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率》


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复苏后的PFF细胞培养至汇合度90%(10 cm板),用0.25%胰酶消化,铺至6孔板,加入2 mL/孔不同浓度梯度的培养基溶液,每个梯度设置3个重复,继续培养48 h。使用RNA抽提试剂盒抽提总RNA,反转录后对cDNA进行实时荧光定量PCR检测,分析NHEJ相关基因XRCC5、XRCC6、LIG4、PNKP和HDR相关基因Rad50、Rad51、Rad52、BRCA1的表达水平。qRT-PCR反应条件:95℃预变性5 min;95℃变性15 s,60℃复性15 s,72℃延伸15 s,40个循环;溶解曲线95℃30 s;60℃30 s;95℃30 s。qRT-PCR引物见表2。