《表2 qRT-PCR检测相应基因的引物序列》

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《miR-148a通过靶定DNMT1调节大鼠间充质干细胞向心肌细胞的分化》

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用氯仿抽提法提取细胞RNA，进行反转录，以2μg提取的细胞总RNA为模板，其中miRNAs反转录首先加入500 nmol/L相应miRNA RT引物4μL配置成模板‐引物混合液。将上述混合液置70℃水浴10 min，0℃冰浴2～3 min。同时配置以下反应体系，具体为:2.5 mmol/LdNTP 4μL，5×RT Buffer 10μL，200 U/mL反转录酶1μL，40 U/mL RNase inhibitor 1μL。将冰浴后模板‐引物混合液加入以上反应体系中，补足至总体积为50μL。42℃水浴90 min后，95℃5 min终止反转录，0℃冰浴5 min，即获得cDNA。该cDNA可用于microRNA Real‐time PCR检测，所用引物序列见表1。基因反转录过程与miRNAs反转录过程类似，无需特异性引物，qRT‐PCR所用引物见表2。以95℃20 s、95℃10 s、60℃20 s、70℃10 s延伸过程循环40次，获得Ct值。计算并比较各样本中相应miRNA及基因的表达水平。