《表1 qRT-PCR分析中的基因的引物序列》

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《眼斑芫菁在斑蝥素合成期的抑制性消减杂交文库构建及分析》

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随机抽取9个EST序列，使用Primer 5.0软件设计特异性定量PCR引物，在NCBI数据库中进行引物特异性比对，引物具体信息见表1．以TAF5、UBE3A和RPL22e为内参基因，用qRT-PCR对差异表达基因进行验证．反应体系（25μL）为:1μL cDNA、12.5μL SYBRPremix Ex TaqTM II（2×）、上下游引物（10μmol/L）各0.5和10.5μL水．反应体系为:95℃预变性10 min；然后95℃变性15 s，58℃退火30s，72℃延伸30 s进行42个循环，添加熔解曲线，确保扩增产物的特异性，每个样品重复测定3次．采用IQ5软件对qRT-PCR得到的试验数据进行分析．