《表1 qRT-PCR中基因的特异引物序列》

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《AM真菌摩西管柄囊霉对干旱胁迫下枳抗氧化酶基因表达的影响》


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采用Easy Spin Plus试剂盒(RN38,Aidlab)提取叶片总RNA。使用PrimescriptTM RT试剂盒和去基因组DNA试剂盒(pk02006,TaKaRa)对RNA样品进行反向转录。利用CFX96(Bio-Rad)检测系统进行实时荧光定量qRT-PCR检测。扩增程序:95℃5min;95℃10s;60℃30s,95℃15s,60℃60s;95℃15s,40个循环。qRT-PCR中的ADC、SOD、POD和CAT基因引物见表1,源于甜橙数据库(http://circuits.hzau.edu.cn/orange)和早期转录组数据比对得到的引物序列。PCR反应体系包括3.5μL无菌水、0.5μL cDNA、5μL SYBR Mix、0.5μL正向引物和0.5μL反向引物。基因相对表达量用2-ΔΔCt法(Livak&Schmittgen 2001)计算,以β-actin作为参考基因。所有基因的转录水平以正常水分供应条件下非菌根化植物的表达量为参考值。