《表1 用于QRT-PCR的各个基因引物序列、序列号和产物大小》

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《SAHA处理对猪手工克隆胚胎体外发育潜能的影响》

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收集高质量胚胎，在无菌PBS中清洗3遍，将5枚胚胎移入8μL细胞裂解液中，-80℃保存，待用；使用微量反转录试剂盒将RNA反转录为c DNA；75℃裂解15 min，冰上2 min瞬离，加入1μL DNaseⅠ、1.3μL DNaseⅠBuffer，37℃消化30 min；加入1μL乙二胺四乙酸（EDTA）、lμL d NTP、2μL随机引物，65℃终止10 min；再加入4μL 5×FS Buffer、0.5μL RNase Inhibitor、2μL二硫苏糖醇（DTT）、0.5μL Super ScriptTMⅡ反转录酶；25℃10 min，42℃90 min，95℃5 min，4℃终止反应。反转录的c DNA置于-20℃冰箱保存。采用Oligo 6.0软件设计5对引物和18S内参引物。QRT-PCR总体积为20μL，包括1μL c DNA模板、10μL SYBR Premix EX TaqTM、0.4μL Rox、0.6μL Primer F/R、8μL RNase Free H2O。反应程序:95℃3 min；95℃30 s，55℃30 s，共40个循环，测定QRT-PCR分析样本相关基因（HDAC1、HAT1、ASF1A、OCT-4）相对表达量。引物信息见表1。