《表1 survivin目的基因的引物序列及产物大小》

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《结直肠癌患者外周血中Survivin mRNA的表达及临床意义》

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注:引物由北京赛百盛公司合成

使用c DNA合成试剂盒（日本Ta Ka Ra公司）根据所测RNA浓度加入2μg RNA总反应体系为20μl，按照说明完成CDNA第一链，继而取4μl cDNA行第1轮PCR扩增，取第1轮PCR产物0.5μl行第2轮PCR扩增。PCR反应体系包括10×PCR buffer 2.5μl（含Mg2+，终浓度1.5mmol/L），d NTP mixture 2.5μl（终浓度250μm/L），上下游引物各2μl（20pmol），Taq酶0.15μl（日本Ta Ka Ra公司），灭菌去离子水补足至25μl。引物序列见表1。循环条件:survivin（外）为40个循环，退火温度为:53℃，survivin（内）为40个循环，退火温度为:60℃，β-actin为35个循环，退火温度为:55℃，取第2轮PCR扩增产物5μl行2%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统拍照。为了控制假阳性率的出现，操作时严格避免靶向序列或扩增产物的交叉污染。