《表1 基因克隆、qRT-PCR引物序列》

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《猕猴桃POD基因的克隆和表达分析》

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从已公布的猕猴桃基因组数据库（Kiwifruit Genome Database，http://bioinfo.bti.cornell.edu/cgi-bin/kiwi/home.cgi）中搜索并下载猕猴桃POD27和POD64基因可能序列（Gene ID:Achn356831和Achn132211），设计引物（表1）进行ORF全长扩增。PCR扩增体系为:2×TransTaq?HiFi PCR SuperMix 12.5μL，c DNA模板50 ng，上下游引物各0.1μmol L–1，补足高压ddH2O至终体积25μL。PCR扩增程序为:95℃预变性5 min，95℃变性30 s，TM退火30 s，72℃延伸1 min，35次循环后再72℃延伸8 min。PCR产物采用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，切割预期目的条带采用EasyPure?Quick Gel Extraction Kit回收，根据试剂盒说明书采用pEASY?-T5 Zero Cloning Kit连接目的片段和载体，转化到Trans1-T1感受态细胞中涂板，37℃暗下培养12 h后挑取单克隆子进行PCR检测，选取阳性克隆子送至北京六合华大基因科技有限公司进行测序。