《表1 靶基因qRT-PCR引物序列》

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《邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对罗非鱼肝脏转录组影响研究》

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用于进行qRT-PCR分析的实验鱼肝脏组织提取总RNA，逆转录后进行实时荧光定量PCR实验.使用Primer Primeir 5软件，根据转录组相关基因的序列设计基因特异引物（表1）.这些基因主要包括免疫相关基因[凝血因子（CF），转铁蛋白（TF），补体因子B（CF-B），甘露糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶（MBLSP），补体C3（CC3），溶酶体膜蛋白（LMP）]，脂类代谢相关基因[脂肪酸羟化酶结构域蛋白（FAH-DCP），Δ-6-脂肪酰基脱氢酶（δ6-FAD），二酰甘油-O-酰基转移酶（2AOA），过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ），酰基-CoA去饱和酶（A-COA-D）]以及生殖内分泌相关基因[胞浆磺基转移酶（C-SULT），透明带精子结合蛋白（ZPSBP），卵黄蛋白原（VL），细胞色素P450 3A40（CYP4503A），类固醇21-羟化酶（S21-H）].在实验中以罗非鱼持家基因延伸因子elongation factor-1α（EF-1α）为内参照.数据处理首先用EF-1α作为内标基因对其他研究基因表达量进行标准化，计算△CT值.以对照组作为参照因子（calibrator），其倍数变化为1，DEHP处理组基因表达差异相对于参照因子基因表达的倍数为2-ΔΔCT.每个样品设置6个生物学重复，并进行3次技术重复，对这些目标基因进行定量分析，计算DEHP处理后基因差异表达倍数.数据结果用（平均值±标准差）表示，并与RNA-seq测序后相关基因表达量进行比较.