《表1 成脂、成骨基因qRT-PCR引物序列》

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《长期传代培养对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响》

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取生长良好的第5、10、20代h UC-MSCs，以1×103细胞/cm2的密度接种到24孔板中。待细胞完全贴壁后分别更换成脂或成骨诱导培养基，每3～4天换液一次，成脂诱导培养14天及成骨诱导21天后PBS漂洗细胞，4%多聚甲醛固定10 min，分别加入油红O工作液或0.1%茜素红染色；镜检观察，以不加诱导液常规培养的hUC-MSCs为对照组[11]。同时，成脂诱导培养14天及成脂诱导培养21天后，吸去培养基，PBS清洗1次，每孔加入TRIzol试剂1 mL，反复吹打溶解细胞，提取RNA备用。按逆转录试剂盒说明书操作合成cDNA，并经荧光定量PCR法检测与细胞分化类型相关的特征性基因（成脂:PPARγ、c/EBP-α、Pref-1；成骨:Runx2、OPN、ALP等）的表达情况。相关引物序列详见表1。