《表5 靶基因qRT-PCR引物设计》

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《南方型紫花苜蓿(Medicago sativa 'Millenium')耐盐相关miRNAs及靶基因预测》

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利用qRT-PCR技术对测序所得到的miRNA及所得到的靶基因的差异丰度进行验证，靶基因及引物序列（表4；表5）。在对照组与盐处理中共筛选出6个差异表达的miRNA及其靶基因对其进行RT-PCR验证（图5），这些miRNA包括miR156a、miR5208d、miR5255、miR169j、N-miR67、N-miR54。结果显示，除N-miR54外，选择的其余5个miRNA在qRT-PCR实验中的表达模式与高通量测序检测到的表达模式一致（图5A），这表明大部分高通量测序的结果均能被荧光定量PCR技术所验证，此次研究数据为真实可信的。所筛选的6个miRNA中，除N-miR54以外，其余5个miRNA均与其靶基因呈负调控关系（图5B），证明miRNA通常以负调控或沉默靶基因的方式来调控植物的生长、发育及对环境的应激反应。