《表1 qRT-PCR引物信息》

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《GWAS结合共表达网络分析挖掘影响油菜种子硫苷积累的作用位点》

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BCAT4：支链氨基转移酶4基因；β-actin：β肌动蛋白基因

参照植物总RNA提取试剂盒说明书提取植物总RNA，用反转录试剂盒合成cDNA。在甘蓝型油菜数据库（http://www.genoscope.cns.fr/brassicanapus/）下载BnBCAT4-C03（BnaC03g68450D）序列，通过Primer Premier 6.0软件设计该基因的qRT-PCR特异性引物（表1）。采用Bio-Rad CFX96TM实时荧光定量PCR仪（BIORAD，美国）检测目标基因的表达模式。参照荧光定量试剂盒说明书配置20μL的反应体系:2×TransStart?Tip Green qPCR SuperMix 10μL，cDNA模板2μL，正、反向引物（0.2μmol/L）各0.5μL，去离子水7μL。qRT-PCR反应程序:94℃预变性30 s；94℃变性5 s，60℃退火30 s，循环数40个。每个样品3次生物学重复。采用2-??Ct的方法分析目标基因的表达，qRT-PCR的实验结果由PCR仪自带软件自动导出，利用OriginPro 9软件作图。