《表1 qRT-PCR引物信息》

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《HIF1α和Beclin1在成年牦牛脑组织中的表达与分布》

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根据牦牛HIF1α（NM＿174339.3）、野牦牛Beclin1（NW＿005394078.1）和牦牛内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）（NM＿001034034.2）序列，用Primer Premier 5.0软件设计引物，由TaKaRa（日本）合成（表1）。使用Lightcycler480（Roche，美国）进行实时荧光定量PCR。PCR反应体系:10μL SYBR Premax Taq、上下游引物（0.2μmol/mL）各0.8μL、cD-NA样品1μL和灭菌ddH2O 6.4μL。PCR反应程序:95℃预变性3 min；95℃变性30 s，退火30 s（具体温度见表1），72℃延伸30 s，40个循环。为保证目的基因相对表达量的准确性，每个样品设置3个重复。利用Excel 2010整理实验数据，根据每个样品的循环阈值（cycle threshold，Ct），采用2-ΔΔCt法计算目的基因的相对表达量，数据均采用平均值±标准误表示。利用SPSS 21.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），P<0.05为显著性差异。