《表1 qRT-PCR引物信息》

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《TNF-α在牦牛卵母细胞及早期体外受精胚胎中的表达》

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根据GenBank数据库中检索的野牦牛（Bos mutus）TNF-αmRNA序列（GenBank No.XM＿005904179.2），用Primer Premier 5.0软件设计了其引物（表1）。以反转录的cDNA为模板，用TNF-α和β-actin的引物扩增牦牛TNF-α基因。qRT-PCR的反应体系为cDNA 1μL，上下游引物（0.2μmoL/mL）各0.5μL，Taq PCR Master Mix 10μL，ddH2O 8μL，总反应体系为20μL。具体的PCR反应条件为:95℃预变性4 min；95℃变性30 s，退火30 s（TNF-α60℃，β-actin 60℃），72℃延伸15 s，35个循环；72℃保存10 min；4℃保存。将扩增产物用10 g/L的琼脂糖凝胶电泳检测。