《表1 qRT-PCR引物信息》

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《表皮生长因子(EGF)对小鼠卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响》


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根据GenBank提供的小鼠mRNA参考序列设计引物(表1),使用实时荧光PCR仪检测Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2基因的表达。反应体系为20μL:cDNA(100 ng/μL)2μL,上下游引物(0.2μmol/mL)各0.8μL,2×SYBR Premix Ex TaqⅡ10μL,Nuclease-Free Water 6.4μL。反应条件:95℃预变性10 s,95℃变性10 s,退火10 s(具体温度见表1),72℃延伸10 s,循环40次,每个样品设置4个重复组,内参基因为β-actin。结果通过2-ΔΔCt公式计算目的基因的相对表达量。