《表1 引物序列:黄瓜CsRPL1/2的克隆及其功能分析》
将拟南芥BELL亚家族基因蛋白序列在黄瓜数据库中(http://www.cucurbitgenomics.org/)进行BLAST比对得到黄瓜BELL亚家族基因蛋白序列。用MEGA 5.2对拟南芥与黄瓜BELL亚家族基因蛋白序列进行系统发育树分析[23]。其中与拟南芥AtRPL(AT5G02030)同源性较高的为CsRPL1(Csa3G733340),同源性次之的为CsRPL2(Csa4G297540)。根据CsRPL的CDS序列,利用Primier 5.0设计克隆引物CsRPL1-F/R、CsRPL2-F/R(引物序列见表1)。用高保真聚合酶进行PCR扩增。扩增程序为95℃预变性2 min;94℃变性25 s;58℃复性30 s;68℃延伸30 s,35个循环;68℃延伸5 min。经电泳检测,琼脂糖凝胶回收产物3′端加A后连接pMD19-T载体。冰浴20 min,42℃热激2 min,转化大肠杆菌感受态DH5α。筛选阳性克隆送北京擎科新业生物技术有限公司测序。
图表编号 | XD00143859300 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.01.01 |
作者 | 宋维源、侯钰、赵剑宇、刘小凤、张小兰 |
绘制单位 | 中国农业大学园艺学院、中国农业大学园艺学院、中国农业大学园艺学院、中国农业大学园艺学院、中国农业大学园艺学院 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |