《表1 引物信息：西花蓟马几丁质合成酶UAP基因克隆及功能分析》

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《西花蓟马几丁质合成酶UAP基因克隆及功能分析》

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在西花蓟马基因组和转录组数据的基础上，获得了FoccUAP基因开放阅读框序列，利用Primer 5.0软件设计全长引物（表1）。西花蓟马总RNA的提取采用Trizol（Invitrogen公司）法，总RNA用EasyScript Reverse Transcriptase反转录试剂盒（北京全式金生物科技有限公司）反转录成cDNA，以此作为PCR模板扩增FoccUAP开放阅读框。PCR体系为20μL∶2μL 10×Taq Buffer，2μL dNTPs(2.5 mmol·L-1），1μL cDNA模板，上下游引物各0.5μL（10μmol·L-1），0.5μL Taq酶，用ddH2O补齐至20μL。反应条件为：95℃预变性2 min；95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，反应35个循环；最后72℃延伸10 min。取5μL PCR产物，加1μL 6×loading buffer混合上样，用1%琼脂糖凝胶电泳检测。片段纯化回收后用5μL与pEASY?-T1 Cloning Kit载体（北京全式金生物科技有限公司）连接，转化后挑选阳性克隆子送福州铂尚生物技术有限公司测序。