《表1 使用的引物：苹果β-淀粉酶基因MdBAM3的克隆和低温响应表达分析》

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《苹果β-淀粉酶基因MdBAM3的克隆和低温响应表达分析》

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以苹果‘71-3-150’叶片cDNA为模板，基于‘71-3-150’冷响应转录组分析获得的“MdBAM3”（王海波等，2016）同源基因MD06G1043900的m RNA序列，及NCBI苹果属植物BAM基因EST校正序列，设计MdBAM3特异引物（表1），克隆该基因的开放阅读框（open reading frame，ORF）序列（图1；图2）。结果表明，MdBAM3的ORF长1 641 bp，编码546个氨基酸，通过Pfam和NCBI CDD数据库确认，该基因编码序列含有完整的葡萄糖基水解酶结构域，包含保守的葡萄糖基水解酶结构域的外环和内环结构，以及2个谷氨酸催化残基（图2），上述结果说明克隆序列属于β-淀粉酶基因家族成员。与拟南芥蛋白组数据库（TAIR10＿pep＿20101214）比对结果表明，该基因编码序列与拟南芥中BAM3蛋白（AT4G17090.1）序列相似性最高（Score:818，E-value:0.0），因此将其命名为MdBAM3基因（GenBank登录号:KX276144.1）。