《表1 引物信息：陆地棉胁迫相关蛋白基因GhSAP8的克隆及其耐盐性分析》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《陆地棉胁迫相关蛋白基因GhSAP8的克隆及其耐盐性分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

Gh：陆地棉；At：拟南芥；SAP：胁迫相关蛋白；Ubi：泛素；Actin2：肌动蛋白2；P5CS1：Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶；RD29B：脱水诱导蛋白29B；SOS1：盐超敏感蛋白1；NHX1:Na+/H+转运蛋白1；下划线与斜体分别表示酶切位点与保护碱基

取100 mg棉花组织，参照Easy Pure Plant RNA Kit（Trans Gen，北京)说明书提取棉花总RNA，以Nano Drop测定RNA浓度，取1μg总RNA参照Easy Script First-Strand c DNA Synthesis Super Mix（Trans Gen，北京）说明书合成c DNA。以c DNA为模板，利用特异性引物Gh SAP8-F/R （表1）进行GhSAP8基因片段的PCR扩增。引物由上海生工生物工程公司合成。PCR反应体系：c DNA （50 ng/μL）1μL、5×Trans Start Fast Pfu buffer 4μL、2.5 mmol/L d NTP 2μL、DNA Polymerase 0.3μL、上下游引物(10μmol/L）各0.5μL，用dd H2O补足20μL。PCR反应条件：95℃5 min；95℃30 s，58℃30 s，72℃30 s，35个循环；72℃10 min。扩增产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳分离，纯化回收后与p EASY-Blunt载体连接并转化大肠杆菌（Escherichia coli）感受态细胞DH5α，挑选阳性克隆交送上海生工生物工程公司进行测序分析。植物总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、DNA Polymerase及p EASY-Blunt载体均购自北京全式金生物技术公司。使用在线分析软件Prot Param tool （https://web.expasy.org/protparam/）预测目标蛋白的氨基酸组成、分子量及等电点。将Gh SAP8基因的氨基酸序列提交NCBI数据库，进行Blast P比对后得到其他物种中的同源序列，利用DNAMan （Version 7）进行蛋白序列比对分析，利用MEGA6构建系统进化树（neighbor-joining法，boot-strap分析1000次）。