《表2 引物序列：发菜固氮基因nifD和nifK克隆及其失水条件下的差异表达》

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《发菜固氮基因nifD和nifK克隆及其失水条件下的差异表达》

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注:CGC:保护性碱基；CCG:保护性碱基；GGATCC:限制性酶切位点Bam HⅠ；CTCGAG:限制性酶切位点XhoⅠNote:CGC:Protective base；CCG:protective base；GGATCC:Rrestriction enzyme Bam HⅠ；CTCGAG:Restriction enzyme XhoⅠ

根据发菜nifD和nifK的测序结果，设计nifD特异性扩增引物（E-nif D-F，E-nifD-R）和nifK的特异性扩增引物（E-nifK-F、E-nifK-R），在上游引物5'末端填加限制性酶切位点Bam HⅠ、下游引物5'末端填加限制性酶切位点XhoⅠ，两端加保护性碱基CGC和CCG（表2）。以含有nifD和nifK的阳性菌液为模板，进行PCR扩增。PCR反应条件:94℃8 min，94℃45 s，50℃45 s，72℃90 s，30循环，72℃11 min，4℃。