《表1 基因克隆及定量PCR引物》

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《多浪羊Lin28A基因克隆及其在初情期启动过程中的表达研究》

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根据克隆得到的多浪羊Lin28A基因cDNA序列跨内含子设计引物（表1），用Real-time PCR（qPCR）试剂盒检测Lin28A基因在下丘脑、垂体、卵巢中的表达量，以内参基因ACTB作为对照。根据miRbase中提供的miRNA成熟序列，设计引物，以U6作为内参基因。引物序列:let-7a F:5′-GCTGAGGTAGTAGGTTGTATAGTT-3′；let-7b F:5′-GTGAGGTAGTAGGTTGTGTGGT-3′；let-7a和let-7b的下游引物由Sino Gene One-step miRNA反转录试剂盒自带；U6F:5′-CTCGCTTCG-GCAGCACATAT-3′，U6R:5′-AACGCTTCACGAAT-TTGCGT-3′。