《表1 基因克隆及定量PCR中的引物》

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《甘蓝SI相关基因BoCDPK14的克隆与分析》

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根据目的基因编码区3?端和5?端的保守序列，以甘蓝A4柱头cDNA和gDNA为模板，利用Kodaq2X PCR MasterMix（abm），以F:5?-ATGGGGAATTG CTGTGGAAC-3?和R:5?-CTCTGCATCGCGATTAT TAGAA-3?为引物扩增BoCDPK14基因全长。同时用NCBI网站和SMART（http://smart.embl-heidelberg.de/）在线分析CDPK14蛋白保守结构域。根据分析结果，结合酵母表达载体pGBDT7序列设计引物CDPK14（35）-BD-F/CDPK14（35）-BD-R，以扩增BoCDPK14激酶结构域序列（表1）。PCR产物经1×104 mg L-1琼脂糖凝胶电泳，回收目的片段，运用快速克隆技术将目的片段连接到相应载体上后转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，经菌液PCR筛选阳性克隆后送上海生工生物工程有限公司测序。