《表1 MSLP克隆及基因定量PCR分析引物》

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《柑橘雄性不育类蛋白基因MSLP的克隆与分析》

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以上述6种栽培广泛柑橘的cDNA为模板克隆MSLP全长，分析MSLP可能存在的转录本，MSLP全长克隆PCR引物见表1。每个品种不同发育时期的花和果实cDNA混合后作为基因克隆模板。采用TaKaRa EX-Taq DNA聚合酶（TaKaRa Biotechnology，大连）进行PCR扩增，配制50μL反应体系，PCR反应程序为：94℃预变性4 min；94℃变性30 s，52℃退火45 s，72℃延伸2 min，共30个循环；72℃延伸10 min后，4℃保存。扩增产物通过1.5%琼脂糖胶电泳约20 min(100 V），用E.Z.N.A?Gel Extraction Kit(OMEGA，USA）回收目的条带。回收产物与pMD18-T载体（TaKaRa Biotechnology，大连）连接，热激转化大肠杆菌DH5α，挑取阳性克隆测序。每个基因至少挑6个克隆测序验证。