《表1 克隆引物序列：响应地黄连作障碍LncRNA-RgAGT2的克隆及表达分析》

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《响应地黄连作障碍LncRNA-RgAGT2的克隆及表达分析》

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依据RACE试剂盒使用说明，选择连作地黄膨大前期块根的总RNA进行3'和5'RACE的cDNA的合成，根据hiTAIL-PCR拼接后的序列分别设计3'和5'RACE特异引物（表1），RACE扩增体系:3'或5'RACE-cDNA 1μL，3'或5'特异引物（10μmol）1μL，10×UPM 1μL，2×SeqAmpTMbuffer 12.5μL，SeqAmp DNA polymerase 0.5μL，加水定容至25μL。扩增程序:94℃，3 min；94℃，30 s，62℃，30 s，72℃，3 min，35个循环；72℃，10 min，16℃保存。Unigene29334＿All全长转录本的验证引物Real-F与Real-R（表1），扩增体系:cDNA 1μL，验证引物Real-F与Real-R（10μmol）各0.5μL，2×Taq MasterMix 12.5μL，加水定容至25μL。扩增程序:94℃，3 min；94℃，30 s，58℃，30 s，72℃，2 min，35个循环；72℃，10 min，16℃保存。