《表2 发酵产物 (Mw<10 kDa) 的分级醇沉组分得率、蛋白含量与抗氧化活性》

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《纳豆菌液态发酵荞麦产物中抗氧化活性物质的分离鉴定》

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注:同列肩标小写字母不同表示差异显著（P<0.05）。表3同。

ORAC法是目前最为简单、准确、灵敏的评价抗氧化活性的方法[23]。本实验以ORAC为评价指标，从发酵产物中导向分离抗氧化肽。据报道，生物活性肽的分子质量小于10 kDa[24]，故将发酵液用超滤膜（截留分子质量10 kDa）进行分离，收集所得Mw<10 kDa的组分用于下一步的分离。分级醇沉是利用不同体积分数乙醇可一定程度降低体系的介电常数，促进蛋白质分子的聚集沉淀，而不同体积分数的乙醇利用其不同的介电常数和争夺水化水的能力可对具有不同亲水能力及结构特性的组分进行初步分离[25]。本实验首先采用乙醇分级沉淀法对发酵产物（Mw<10 kDa）进行初级分离，得到5个不同的分级组分，结果如表2所示。体积分数（下同）20%和40%醇沉组分得率较低，而60%和80%醇沉组分和上清液组分得率较高，是发酵产物（Mw<10 kDa）中主要的组成成分。此外，60%和80%醇沉组分蛋白质量分数相对较高，分别为27.67%和25.89%，显著高于其余组分。各组分的抗氧化活性从强到弱依次是:上清液组分>80%醇沉组分>60%醇沉组分>40%醇沉组分>20%醇沉组分。80%醇沉组分得率最高，蛋白质量分数最高，抗氧化活性强，对其进行下一步分离纯化，以期获得蛋白含量高、抗氧化活性更强的肽。