《表1 泥鳅Ma-trim63a克隆和荧光定量PCR引物》

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《泥鳅二倍体与四倍体trim63a基因的克隆及表达分析》

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从NCBI数据库中下载斑马鱼（Danio rerio）的trim63a基因序列，与笔者所在实验室泥鳅二倍体转录组数据库（https：//www.nature.com/articles/s41598-018-29991-6）通过生物信息学比较分析，设计引物（表1），引物由天一辉远生物科技有限公司合成。按照TaKaRa LA Taq (TaKaRa，日本）说明书进行PCR扩增，反应程序如下：94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃1 min，35个循环；72℃10min。PCR产物用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测；目的片段按照OMEGA Gel Extraction Kit (OME-GA，美国）说明书进行胶回收；连接pMD-18T载体（TaKaRa，日本），转化到感受态细胞E.coli DH5α（全式金，北京）中进行克隆，PCR检测后将阳性克隆送天一辉远生物科技有限公司进行测序。