《表1 海带CRY-DASH基因扩增及定量PCR分析所用引物》

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《海带CRY-DASH基因的克隆与转录表达分析》

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根据本研究组已注册海带受蓝光诱导的转录组信息（注册号GSE33853）[13]，选取候选目的序列进行同源性比对。为进一步获得SjCRY-DASH序列全长，用Primer Premier 5软件设计5′-RACE和3′-RACE特异引物（表1）。根据RACE扩增反应体系的要求，分别扩增得到5′末端和3′末端，将两段有重叠部分的序列拼接在一起。根据拼接的序列信息，用高保真DNA聚合酶扩增SjCRY-DASH的开放阅读框（open reading frame，ORF），引物使用CRY-DASH-F和CRY-DASH-R（表1）。将所获目标片段进行胶回收，然后连接于pMD19-T载体（TaKaRa公司），经过转化到感受态细胞DH5α，通过引物和PCR检测分析，获得的阳性克隆送至上海生物工程有限公司测序。