《表1 扬子鳄α型干扰素基因PCR扩增所用引物》

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《扬子鳄α型干扰素基因的克隆分析及表达量的测定》

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根据GenBank上预测的扬子鳄α型干扰素的序列（XM＿006026085.1），使用Primer Premier 5.0对引物进行设计（见表1）。PCR反应体系（50L）:反转录产物cDNA 1L，上、下游引物（10 pmol/L）各1L，10×PCR Buffer 5L，dNTP（10 mmol/L）2L，Taq DNA聚合酶1L，RNase Free dH2O 39L。反应程序:95℃5 min；95℃30 s，56℃30 s，72℃90 s，30个循环；最后72℃延伸10 min。PCR产物经10 g/L琼脂糖凝胶电泳，鉴定正确后按照胶回收试剂盒说明书要求进行凝胶回收。纯化后的片段与pMD19-T载体按照载体说明书进行连接以构建重组克隆质粒，转化入DH5α感受态细胞中，经LB培养基过夜培养后，挑取单菌落振荡培养8 h，对菌液进行PCR鉴定。初步鉴定正确的菌液送至苏州金唯智生物科技有限公司进行通用引物测序。