《表1 PCR扩增所用引物》

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《施加石灰石粉和微生物肥料对发病山核桃林土壤化学性质和微生物群落的影响》

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说明：GC夹序列为CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCC-CGCCCCCGCCC

PCR用土壤总DNA作为模板，FR1、FF390（真菌）和338F、518R（细菌）为引物（表1)，20.0μL反应体系[20]:2×SYBR Premix Ex TaqTM10.0μL，上下游引物各0.2μL，模板DNA 1.0μL，灭菌超纯水补足20.0μL，每个样品3次重复，反应程序具体如下：真菌，预变性95℃3 min；变性95℃30 s，退火55℃30 s，最后72℃延伸30 s，31个循环；溶解曲线过程（65℃到95℃，0.5℃·s-1）；细菌，预变性95℃3 min；变性95℃30 s，退火56℃30 s，最后72℃延伸30 s，31个循环；溶解曲线过程（65℃到95℃，0.5℃·s-1）。标准曲线制作：用已知种属的阳性克隆子扩增培养后提取质粒DNA，检测其浓度和纯度[D(260）/D(280）]后，将质粒以10倍梯度稀释（10-3～10-8），作为标准样品，计算细菌真菌的基因拷贝数[26]。反应程序和体系反应体系同上。