《表1 PCR扩增所用引物》

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《猪JMJD3基因真核表达及其对炎性因子表达调控的研究》

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下划线碱基为酶切位点，小写碱基为加入的保护碱基

含有JMJD3基因（GenBank登录号:MK250967）的质粒pUC57-JMJD3，由本实验室构建。本研究以重组克隆质粒为模板进行PCR扩增（引物序列见表1）。反应条件:98℃变性10 s，68℃延伸6 min，30个循环，4℃保存。通过琼脂糖凝胶电泳将目的DNA片段进行纯化回收，将回收的PCR产物与p3xFlag-CMV-14真核表达载体分别用Not I和Xba I进行双酶切，酶切产物纯化后16℃连接过夜，连接产物转化至DH5α感受态中，涂布于含有Amp的LB琼脂平板，37℃培养12～16 h，挑取单克隆接种于含有Amp的LB液体培养基中，5～8 h后通过菌液PCR鉴定，提取质粒进行双酶切鉴定，将鉴定阳性的重组质粒送上海英骏生物技术有限公司进行测序。