《表1 用于罗非鱼TNF-R1和TNF-R2克隆以及定量检测所用引物》

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《尼罗罗非鱼TNF-R1和TNF-R2基因克隆及表达》

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根据NCBI上已发表的鱼类：牙鲆、金鱼和斑马鱼（Danio rerio）的相关c DNA保守序列设计兼并引物（表1）。以尼罗罗非鱼脾脏RNA反转录产物为模板进行PCR扩增。根据得到的TNF-R1与TNF-R2 c DNA中间片段设计特异性引物（表1）进行5?-RACE和3?-RACE反应。PCR产物经w=1.5%琼脂糖凝胶电泳分离，经E.Z.N.A?Gel Extraction(Omega Bio Tek）回收目的片段，将回收产物连接到p TZ57R/T (Fermentas，China）载体并转化大肠杆菌DH 5α，测序由广州Invitrogen生物技术有限公司完成。每个样品设3个重复。