《表1 各基因的PCR引物序列》

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《KRAS基因沉默介导MAPK1/MAPK3信号通路对乳头状甲状腺癌上皮间质转化的分子机制研究》

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用Trizol试剂提取组织和细胞总RNA后，按照PrimeScript RT试剂盒说明书进行反转录合成cDNA，4℃保存。在实时荧光定量PCR仪进行扩增，用分析软件iQ5进行定量分析，PCR反应体系：上游下游引物（10μmol/L）各0.6μl、cDNA溶液1μl、SYBR Green I Master10μl、dH2O 7.8μl。反应条件：95℃，10 min，1个循环；PCR反应95℃，15 s；60℃，1 min，40个循环。KRAS、JNK、ERK1、ERK2、E-cadherin、Vimentin、ZEB1及U6引物由北京六合华大基因科技股份有限公司合成，以U6基因作为内参，引物序列见表1。本实验重复3次。此方法同样适用于细胞实验。