《表1 各基因反转录引物与PCR引物序列》

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《GAS5对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响》

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利用总RNA提取试剂盒提取正常培养的U2OS细胞和hFOB 1.19细胞中的总RNA，紫外分光光度计测定RNA浓度后分别利用High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit和MicroRNA Reverse Transcription Kit将GAS5和miR-221逆转录成cDNA。以cDNA为模板，利用Maxima SYBR Green qPCR Master Mix（2×）配制qPCR反应体系，之后在荧光定量PCR仪上测定GAS5和miR-221的相对表达水平，分别以GAPDH和U6 snRNA作为内参，按照2-ΔΔCt公式计算结果。然后收集转染pcDNA-GAS5重组质粒48h的U2OS细胞，采用同样方法检测GAS5的转染效率及GAS5对miR-221表达的影响。引物见表1。