《表1 各基因PCR引物序列》

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《芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶抑制剂1表达的影响》

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取肺组织100 mg于1.5 m L无酶EP管中，加入1 mL预冷Trizol液，剪碎组织块，匀浆60 s，采用酚/氯仿萃取法提取总RNA，微量核酸蛋白检测仪测定RNA的纯度和浓度，取2μg RNA按反转录试剂盒说明书合成cDNA，然后以cDNA为模板按荧光定量PCR试剂盒说明书进行扩增。反应体系:23SYBR?Premix Ex Taq TM 25μL，引物F（10μmol/L）1μL，引物R（10μmol/L）1μL，无核酸无酶水21μL，c DNA2μL，总体积50μL。MMP-9扩增条件:95℃预变性1 min；95℃、10 s，56℃、30 s，72℃、30 s收集荧光，45个循环；溶解曲线制备60~95℃，0.5℃/s。TIMP-1反应条件:95℃预变性1 min，95℃、10 s，60℃、30 s，72℃、30 s收集荧光，45个循环；溶解曲线制备60~95℃，0.5℃/s。根据荧光定量PCR所得Ct值，以β-actin为内参照计算2-ΔΔCt，结果以正常对照组表达水平进行归一化处理分析，引物设计见表1。