《表1 PCR各基因的引物序列和名称》

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《朱砂七拮抗耐药金黄色葡萄球菌的实验研究及免疫调节机制初探》


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AT-Ⅱ细胞共分4组:正常组(NS)、MRSA组、朱砂七(PC,2 g/L)+MRSA组、青霉素(PG,200 mg/L)+MRSA组。AT-Ⅱ细胞(朱砂七+MRSA组及青霉素+MRSA组同时加入相应药物共培养)后加1 mL Trizol匀浆,转移至1.5 mL无菌离心管。所收集细胞按照5×106个细胞加入1 mL Trizol,再加200μL氯仿至1.5 mL离心管中,按照常规方法制备细胞总RNA,并检测RNA纯度,A260 nm/A280 nm应为1.8~2.0。试验所用引物mRNA由北京生工生工程技术服务有限公司合成,使用前以双蒸水配为10μmol/L,各引物序列见表1。利用AB applied biosystem全自动PCR仪进行梯度温度反应设置。PCR反应条件如下:94℃预热5 min;94℃下变性45 s,60℃条件退火30 s,72℃延伸60 s,总计40个循环;再72℃条件下10 min。