《表1 RT-PCR各基因引物序列》

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《截断逆挽方含药血清对D-氨基半乳糖诱导的人正常肝细胞LO2细胞增殖影响》

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各组细胞处理后，根据总RNA提取试剂盒说明书操作步骤进行。细胞总RNA提取后根据逆转录说明书进行配液，将总RNA反转成cDNA。配制Real Time PCR反应液，反应条件为95℃（15分钟），95℃（10秒）、60℃（20秒）、72℃（30秒）40个循环。反应完成后使用，得到样本目的基因和内参CT值，根据2-△△CT法检测目的基因的相对表达水平。引物序列，详见表1。1.5.4 Western Blot检测各组细胞DP1蛋白表达情况各组细胞药物干预后，弃旧液，PBS洗2次，加入裂解液，裂解10分钟后刮取细胞，离心取上清液，蛋白定量后加入适量的Loading Buffer，将其置于金属浴中，100℃、10分钟进行蛋白变性。配制10%的分离胶和浓缩胶，每个样本取20μg蛋白开始上样电泳，电泳条件为90 V、30分钟，120 V、60分钟。电泳结束后进行转膜，转膜条件为300 m A、60分钟。转膜后剪去目的蛋白和内参条带，以5%脱脂牛奶进行封闭1小时，TBST清洗3次，每次10分钟。之后孵育一抗，4℃过夜。复温1小时后，TBST清洗3次，每次10分钟。二抗孵育1小时后TBST清洗3次，每次10分钟。配制ECL发光液随后进行蛋白条带曝光。