《表1 玉米印迹基因RT-PCR引物序列》

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《组织培养诱导的玉米F_1杂交种印迹基因的表达变异研究》


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从Zhang等和Waters等[5,8]报道的玉米印迹基因中随机选出20个印迹基因,用Primer Premier5.0软件设计引物(见表1).同时,以玉米肌动蛋白基因Actin(ID:GRMZM2G126010)设计参照引物进行PCR,调整各个样品的起始量进行均一化.Actin基因的正反向引物序列分别为CCTGAAGATCACCCTGTGCT和GCAGTCTCCAGCTCCTGTTC.PCR反应参数为:95℃初始变性2min;然后,95℃30s,60℃40s,72℃40s,25~30次循环(对不同引物,根据预实验结果调整循环数);最后72℃延伸8min.PCR反应体系为20μL,使用的试剂购自Takara公司.RT-PCR产物用1.5%琼脂糖进行凝胶电泳.基因功能注释信息查询NCBI数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和MaizeGDB(https://www.maizegdb.org/)(见表2) .