《表1 RT-PCR检测相关基因的引物序列表》

《表1 RT-PCR检测相关基因的引物序列表》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《穿心莲内酯对苯肾上腺素诱导的H9C2细胞肥大和氧化应激的作用及机制》


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(1)mRNA的提取:细胞经胰酶消化后,接种于6孔板中,每孔约100μl(细胞浓度1×106个/ml),给予每组相应处理后用于RNA的提取。收集每孔H9C2细胞于EP管中,分别加入1 ml Trizol试剂提取RNA,按200μl·ml-1Trizol的比例加入三氯甲烷抽提RNA,预冷4℃低温12 000×g离心15 min后将上层含RNA水相小心转移至新的EP管中,等体积加入异丙醇静置后4℃、12 000×g离心15 min,弃上清后用去离子水配制的75%乙醇漂洗RNA,并溶于10μl的去离子水中。分光光度计检测RNA浓度和纯度。(2)RT-PCR检测:按试剂盒说明书反转录后,LightCycler 480 SYBR Green I Master用于上机检测氧化应激和肥大相关因子的mRNA表达水平,GAPDH用作内参。引物序列见表1。