《表1 q RT-PCR检测肠道紧密连接蛋白的相关基因及序列》

《表1 q RT-PCR检测肠道紧密连接蛋白的相关基因及序列》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《重组GCRV-VP6枯草杆菌芽孢口服免疫对草鱼肝肠功能影响》


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取各组草鱼5条,丁香酚麻醉,取其同一位置的前肠、中肠、后肠约1.0 cm,PBS清洗去除内容物,于300 m L样品保护剂中,随后按照Trizol Reagent试剂盒说明书提取组织总RNA,酶标仪测定总RNA溶度,并按照逆转录试剂盒说明书将所提取的RNA逆转录成c DNA。检测肠道紧密连接蛋白基因包括:Claudin b、Claudin 3、Claudin 12、Claudin C、ZO-1和Occludin。qRT-PCR反应体系为20μL,18sRNA为内参。按照qRT-PCR试剂盒说明书将各反应物加入96孔板,离心,置于CFX96 PCR(美国,Bio-Rad公司)仪器中并设定反应程序:94℃30 s,94℃5 s,55℃15 s,72℃10 s,共35个循环。利用2-△△Ct计算m RNA相对水平。相应引物见表1。