《表2 引物序列：白藜芦醇对氧化应激仔猪回肠黏膜形态、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA表达的影响》

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《白藜芦醇对氧化应激仔猪回肠黏膜形态、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA表达的影响》

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采用实时荧光定量PCR检测肠黏膜闭锁小带蛋白-1(ZO-1）、闭锁蛋白（Occludin）和跨膜蛋白（Claudin）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6(IL-6）和白细胞介素-10(IL-10）的mRNA相对表达量。RNAiso Plus试剂盒提取回肠黏膜组织总RNA，利用超微量分光光度计测定仪检测RNA浓度，吸光度在OD260/OD280=1.8～2.2表示RNA纯度较高；采用琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA品质，电泳后可见28s、18s和5s的小分子条带则说明RNA完整性较好，之后保存于-80℃备用。HiScriptⅢRT SuperMix for qPCR试剂盒说明进行cDNA的合成，得到的cDNA于-20℃保存备用。以反转录的cDNA为模板扩增基因，进行实时荧光定量PCR(Vazyme Biotech）检测。反应程序为：95℃30 s→95℃10 s→60℃30 s(40个循环）；熔解曲线95℃15 s→60℃60 s→95℃15 s。甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参，采用2-ΔΔCt法计算各组基因的mRNA相对表达量。利用Premier 5.0软件设计引物，引物序列见表2[16-17]。