《表1 反转录和预扩增引物名称和序列》

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《猪猝死症4种重要病原多重连接探针扩增鉴别检测技术的建立与应用》

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根据GenBank登录的相应病毒和细菌相对保守的基因序列设计引物和探针（表1），并利用MUSCLE Alignment（Geneious8.1.4）进行序列比对以确定每个基因中相对保守的区域，用于特异性反转录和预扩增。这些引物扩增的片段包含MLPA探针结合的区域。探针设计参照MRC-Holland公司公开的流程（Designing synthetic MLPA probes，Version 15）。探针分别结合NPV的N基因、ASFV的p27基因、C.perfringens的plc基因、A.pleuropneumoniae的Apx IVA基因中相对保守的区域（表2）。左侧探针（Left Probe，LP）由两段核苷酸组成，一段是病原特异性序列（Left Hybridising Sequence，LHS），一段是用于扩增的通用序列；右侧探针（Right Probe，RP）由两段核苷酸组成，一段是病原特异性序列（Right Hybridising Sequence，RHS），一段是用于扩增的通用序列，且右侧探针的5'端磷酸化处理。通过设计不同长度的探针区分不同病原。引物和探针均由金唯智（苏州）生物有限公司合成。