《表2 扩增DGFP的上、下游引物名称和序列》

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《盘基网柄菌DJ-1蛋白的亚细胞定位研究》


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DGFPF:扩增DGFP的上游引物,DGFPR:扩增DGFP的下游引物,其中DJ-1基因的终止密码子TAA被去掉。5′-端添加GC为了提高限制性内切酶内切效率。引物序列中加粗部分为限制性内切酶的识别序列,分别为:Eco R I(GAATTC)和Cla I(ATCGAT)。

参照盘基网柄菌DJ-1的基因序列,利用Primerquest软件设计上、下游引物扩增除终止密码子外的DJ-1基因片段(DGFP)(表2) 。引物由Geneworks公司进行合成。以盘基网柄菌总基因组DNA为模板,利用表2设计的引物和Taq聚合酶对DGFP进行PCR扩增。