《表1 反转录及PCR引物》

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《血清IL-17A、miR-1266-5p水平与银屑病严重程度指数的相关性分析》

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取200μL血清标本，加入1mL RNAiso for Small RNA试剂，提取过程严格按照RNAiso for Small RNA试剂说明书进行。反转录采用茎环方法，整个过程U6作为内参基因，引物见表1。总体系20μL，提取的small RNA 8μL，茎环RT引物1μL，U6反转录引物1μL，RNase inhibitor1μL，Reverse Transcriptase（M-MLV）1μL，5×1st Strand Synthesis Buffer 5μL，dNTP 5μL，瞬时离心混匀，反应条件为65℃10min；25℃15min，42℃60 min，75℃15 min，反应结束后-20℃保存。荧光定量PCR检测采用嵌合染料SYBR法，整个过程严格按照SYBR Perfect Real Time试剂盒的体系和条件进行，结果的计算采用2-△△CT法进行，每次反应中，每个样品至少重复3次，由荧光分析软件自动进行定量，最后取平均值。