《表1 miRNA反转录引物》

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《miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控作用》

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根据引物设计原则，设计miRNA分析的实时荧光定量聚合酶链式反应（realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction，qPCR）引物（表1）和信使RNA（message RNA，mRNA）分析的荧光定量PCR引物（表2）.按照Trizol RNA提取试剂盒说明提取总RNA，Promega反转录试剂盒进行反转录.按照荧光定量试剂盒说明书进行qPCR分析，其中miRNA分析的PCR总反应体系为20μL，反应条件:95℃15 min；94℃20 s、60℃34 s，共43个循环.mRNA分析以β-actin为内参基因，PCR总反应体系为20μL，反应条件:95℃30 s；95℃5 s；60.8℃15 s、72℃15 s，共40个循环.溶解曲线反应条件:95℃30 s；55℃30 s、55℃15 s，81个循环.以ddH2O为阴性对照，每个样本做4个复孔用Bio-rad iQ5 qPCR仪及自带软件进行熔解曲线分析.miRNA相对表达量用2-△△Ct法分析qPCR数据，并应用t检验进行样本间的比较.